Housekeeping genes selection for gene expression on Citrus sinensis infected with CLas or CTV using RT-qPCR

Una posible alternativa para el control de CTV y C Las en Citrus sinensis es el empleo de resistencia genética adquirida. El estudio de este mecanismo, requiere normalizar con genes de referencia. Por lo tanto, se desarrolló un protocolo de cuantificación de expresión génica mediante RT-qPCR para evaluar el uso potencial de GAPDH , ACTINA , F-BOX , COX y 18S rRNA como genes de referencia en cítricos. Un total de nueve plantas infectadas con CTV (3), C Las (3) y sanas (3) se emplearon para seleccionar una muestra compuesta de ocho hojas/planta. El protocolo no comercial se desarrolló y optimizó en todas sus etapas variando concentración de reactivos, iniciadores y sustrato de reacción. La extracción del ARN total con CTAB al 2% estuvo en el rango de 200-1000 ng ?L-1. La retrotranscripción produjo en promedio 1069 ng ?L-1 ADNc. Los productos de los genes de referencia GAPDH , ACTINA y F-BOX exhibieron curvas de disociación sin expresión de dímeros, Ct ? 28 y eficiencias de reacción en el rango de 90-110%. En todas las expresiones de genes, muestras con CTV tuvieron los Ct´s más tardíos (25-27) seguido de las muestras sanas (24-25). Sin embargo, GAPDH y ACTINA presentaron la expresión génica más estable (ln 1/M = 2.83) por lo que estos genes se proponen para normalización. El protocolo RT-qPCR fue también específico y eficiente para el gen CDR13, putativamente asociado a resistencia sistémica adquirida a CLas, lo que sugiere su viabilidad en estudios de resistencia de C. sinensis / C. aurantium en respuesta a la infección de CTV y CLas.