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As diversas estrategias empregadas para inducao da duplicacao cromossomica geram individuos com diferentes ploidias, inclusive mixoploides. Nesse sentido, e fundamental o uso de metodos que distinguem esses individuos. Dentre os metodos diretos, o unico que inequivocamente confirma o nivel de ploidia e a contagem cromossomica. Dessa forma, o presente trabalho tem por objetivo determinar o numero cromossomico de alotriploides e hexaploides putativos oriundos da inducao da duplicacao cromossomica do alotriploide Hibrido de Timor (HT) ‘CIFC 4106’ (Coffea arabica x Coffea canephora). 48 plântulas foram regeneradas a partir de um novo procedimento, envolvendo calos embriogenicos friaveis tratados com colchicina (0,5; 1,5 ou 2,5 mM) por 96 h. A citometria de fluxo (CF) foi realizada a partir de fragmentos foliares dos individuos regenerados, pre-selecionando os alotriploides e os supostos hexaploides. Meristemas radiculares desses individuos foram tratados com 90 µM de ciclohexamida e 4 µM amiprofos-metil durante 1 h 45 min a 25oC, e macerados em pool enzimatico (celulase 4%, macerozime 1% e hemicelulase 0,4%) por 2 h a 34oC. Em lâminas preparadas por dissociacao celular e secagem ao ar, metafases com 2n=3x=33 e com 2n=6x=66 cromossomos foram encontradas. A tecnica empregada permitiu a obtencao de cromossomos bem espalhados na lâmina, garantindo uma contagem precisa do numero de cromossomos. O procedimento citogenetico foi primordial em virtude do elevado numero de cromossomos, uma vez que, a tecnica de esmagamento amplamente empregada, possivelmente resultaria em cromossomos sobrepostos. A CF possibilitou o screening de muitas plântulas em um curto periodo de tempo, mas a contagem cromossomica foi primordial para a determinacao do nivel de ploidia, uma vez que, pequenas alteracoes aneuploides podem nao ser detectadas pelo citometro de fluxo. Por se tratar de um experimento conduzido in vitro , a obtencao de cromossomos metafasicos e favorecida pela alta taxa proliferativa do material biologico, aliado a uma padronizacao refinada dos pre-tratamentos citogeneticos. O resultado da CF corroborou com a citogenetica, permitindo avaliar o nivel de ploidia a partir de diferentes tecidos, folhas e raizes, respectivamente. Dessa forma, a determinacao do numero de cromossomos deve ser parte indispensavel do rigor experimental em experimentos de duplicacao cromossomica.

Confirmação da indução da hexaploidia do alotriploide “Híbrido de Timor” ‘CIFC 4106’ por contagem cromossômica