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A simple, precise and accurate method was developed and validated to extract and determine lactose over a wide linear working range using liquid chromatography with refractive index detection based on the principles of green chemistry. With its minimum level established by the MAPA (Ministry of Agriculture, Acquaro Jr VR et al. Desenvolvimento e validação de método para extração e quantificação através de HPLC 138 Scientia Chromatographica 2013; 5(2):137-145 1 Introdução O Brasil é um dos maiores produtores mundiais de leite, detendo a quarta posição, atrás dos Estados Unidos, Índia e China. O leite, dentre as commodities agropecuárias, vem depois da soja, cana-de-açúcar e milho. A sua produção em 2011 alcançou 32,1 bilhões de litros, frente aos 27,6 bilhões ofertados em 2008, representando uma taxa de crescimento anual de 5,3%. Essa produtividade tem impulsionado a elevação do consumo, que está em 173 litros de leite per capita por ano[1]. O leite é considerado o mais nobre dos alimentos, como uma importante fonte nutritiva para o ser humano, devido a sua composição rica em proteínas, gorduras, carboidratos, sais minerais e vitaminas[2,3]. Essa composição pode variar em função da fisiologia, raça, estado de saúde e alimentação dos animais[3-5]. Todavia, nos últimos anos têm-se verificado alterações por constantes adulterações, com adição de água ou neutralizantes ou substâncias que ameaçam a segurança alimentar como: melaminas, ureia, nitrato de amônia, urina e peróxido de hidrogênio[4,6]. O Ministério da Agricultura Pecuária e Abastecimento (MAPA), visando dar um norte ao setor quanto à qualidade, determina valores mínimos em termos de variação dos componentes do leite. Para a gordura e a lactose são exigidos teores mínimos de 3,0% e 4,3%, respectivamente. Para o extrato seco total é requerido um mínimo de 11,5%, enquanto para o extrato seco desengordurado o teor mínimo é de 8,5%, com quantidade mínima de proteína de 3,0%4. Nesse sentido, determinar o teor de lactose, o carboidrato mais abundante no leite, é importante, uma vez que esse açúcar contribui para as propriedades funcionais e sensoriais do produto; agrega valor econômico, já que o preço do leite baseia-se no teor de sólidos; e é um dos parâmetros de qualidade, que pode auxiliar na detecção das fraudes. Portanto, é fundamental para a saúde pública que estudos relacionados a métodos capazes de comprovar a autenticidade do leite e de detectar adulterações pela incorporação de substâncias desconhecidas sejam desenvolvidos[7]. O método oficial para a determinação de lactose em leite, o 984.15 da AOAC (The Association of Analytical Communities) é Livestock and Food Supply of Brazil), lactose has been chosen as a quality marker to set milk prices and facilitate fraud detection. Since milk is a complex matrix rich in proteins, lipids, carbohydrates, mineral salts and vitamins, it requires proper sample pretreatment. The present work was aimed at developing and validating a methodology for establishing parameters and analytical conditions in order to increase lactose percentage extracted from milk. For this purpose, a central composite statistical design with three independent parameters (centrifugation time, rotation intensity and solvent/sample dilution ratio) was employed. The statistical treatments allowed finding optimum extraction conditions average recovery rate 105 %, ethanol: milk ratio 4:1 (v/v), and rotation 10,000 rpm for 37 min. The proposed method with appropriate chromatographic resolution between lactulose and lactose, using water as the mobile phase, and only ethanol for sample pretreatment, instead of expensive reagents and toxic solvents, is a distinct and feasible alternative to determine lactose contents of pasteurized milk.

Desenvolvimento e validação de método para extração e ­quantificação através de HPLC com índice de refração para ­lactose em leite pasteurizado

Desenvolvimento e validação de método para extração e quantificação através de HPLC com índice de refração para lactose em leite pasteurizado