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Existen diversas estrategias diagnosticas para identificar leptospiras, siendo la reaccion en cadena de la polimerasa (PCR) una tecnica de alta sensibilidad y especificidad. El presente trabajo tuvo como objetivo optimizar tecnicas de extraccion de ADN a partir de cultivos bacterianos y establecer condiciones de PCR multiplex para diferenciar leptospiras saprofitas de patogenas. Para ello se ensayaron tecnicas de bromuro de cetiltrimetil amonio (CTAB) y hervido (boiling). Se analizaron dos secuencias de acidos nucleicos, correspondientes a una fraccion de un gen conservado en ambos grupos de bacterias (ARNr 16S) y otra procedente de una fraccion de un gen (LipL32) presente solo en especies de leptospiras patogenas, las cuales dieron amplicones de 474 y 430 pb respectivamente, utilizandose como controles positivos de amplificacion muestras de cultivos bacterianos de Leptospira icteroahemorragiae, L. canicola y apatogena (Patoc I), utilizando agua como control negativo. Se concluyo que no existen diferencias en la perdurabilidad del ADN extraido a partir de cepas de referencia al comparar el metodo de digestion con el detergente CTAB y el de boiling y sus variantes. Considerando el mas bajo costo y menor tiempo de desarrollo, este ultimo resulto la mejor alternativa para la obtencion de moldes para amplificacion por PCR.

Detección y diferenciación molecular de Leptospira sp. utilizando diferentes técnicas de extracción de ADN