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Un protoplasto vegetal es una celula que carece de pared celular, se encuentra rodeada por su membrana plasmatica y es potencialmente capaz de regenerar la pared celular, crecer y dividirse. El objetivo del trabajo fue evaluar diferentes concentraciones de enzimas comerciales y tiempos de accion en el aislamiento de protoplastos de Dioscorea alata cultivar Pico de Botella. Los protoplastos fueron aislados del mesofilo de vitroplantas combinando concentraciones de las enzimas Celulasa Onozuka R10® (0,0 a 1,5% p/v) y Macerozima R10® (0,0 a 0,5% p/v), a tiempos de accion de 6 a 18h y pH de 5,6; exponiendo aproximadamente 0,015g de hoja en medio de aislamiento de protoplastos de name a 27±2 °C, 40 rpm, seguido de lavado en medio de aislamiento sin enzimas, purificacion en sacarosa al 24%, resuspension en medio de cultivo de protoplastos de name y conteo en camara de Neubauer. La mayor cantidad de protoplastos se obtuvo con Celulasa al 1% y Macerozima al 0,5% en 18h de accion, con un promedio de 18,6 x106 protoplastos g-1 de tejido fresco. Los analisis de regresion (R2 = 0,84) de los datos obtenidos arrojaron, que las condiciones optimas para obtener la mayor cantidad de protoplastos aislados corresponden a una combinacion de 0,96% de Celulasa y 0,36% de Macerozima, a 13,99 h de accion, estimando un valor de 15,3x106 protoplastos g-1 de tejido. El metodo enzimatico permite aislar protoplastos de name, recomendandose evaluar su viabilidad para regeneracion su pared celular, crecer, dividirse y formar microcolonias y microcallos.

Aislamiento enzimático de protoplastos a partir de mesófilo de Dioscorea alata cultivar “Pico de Botella”