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リン酸化など細胞内で起こっているタンパク質の化 学修飾を, 細胞刺激後の実時間で観察したいと思うの は誰しもであろう. 脊椎動物視細胞での光-化学信号 変換系は応答速度の速い細胞内信号伝達系の代表格で あり, 棒状の光受容部である外節での化学反応は数十 ミリ秒のタイムスケールで進行する. こういった細胞 内での化学反応を急速に停止するには, 網膜を瞬間凍 結することが考えられる. しかし, 凍結した網膜から外 節だけを調製するにはひとくふうがいる. コロンブス の卵というのはおこがましいが, 凍結後, 脱水乾燥した カエル網膜から市販のセロテープで視細胞外節が面白 いほどきれいに単離できることをご紹介したい. 図1で イメージを示すように, セロテープで黄色い外節層を剥 がし取るわけである. 視細胞外節はコネクティングシリ ウムのところで, 内節以降と切り離され, 退色したロド プシンの真っ黄色な層と, 真っ白な内節以降の神経層と に分離できる. この方法を使えば, もともと外節に存在 するタンパク質を操作途中で失うことなく, 外節を単離 することができる. 筆者等はこの方法を用いて, 視細胞 のcGMPホスホジエステラーゼ阻害サブユニットのリ ン酸化と迅速な脱リン酸化を観測している1), 2).

A New Isolation Technique of Protoreceptor Rod Outer Segments.