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Summary Background: cryopreservation is an important biotechnological tool in the conservation of biodiversity, particularly for endangered species. Objective: to evaluate six different spermatozoa/oocyte ratios using fresh and cryopreserved semen in bocachico fish ( Prochilodus magdalenae ). Methods: fresh semen was collected and its quality determined to verify cryopreservation feasibility. The semen was put in 5 ml straws and mixed with a solution (5.5% glucose, 12% egg yolk, and 10% dimethyl sulfoxide -DMSO-) in a 1:4 dilution (semen:solution). The semen was frozen in nitrogen vapor dry shipper for 30 min, rapidly transferred to storage thermos, and submerged directly into liquid nitrogen (LN; -196 °C). Straws were thawed at 60 oC for 45 seconds. Motility, velocity, and sperm progressivity of fresh and cryopreserved semen were assessed using Sperm Class Analyzer (SCA ® ) software. Each proportion of spermatozoa/oocyte was assessed with 2 g of eggs (1,630 ± 87 eggs/g) to evaluate fertility (F), hatching (H), and larval survival (LS) rates. Results: the best reproductive performance for fresh semen was obtained inseminating with 160,000 spermatozoa/oocyte (F = 75.0%, H = 67.7%, LS = 32.7%). Similarly, the best reproductive performance for cryopreserved semen was achieved with 320,000 spermatozoa/oocyte (F = 70.0%, H = 48.6%, LS = 19.5%). Conclusion: it is possible to achieve adequate reproductive performance in bocachico fish using cryopreserved sperm (10% DMSO, 5.5% glucose, and 12% egg yolk) at twice the spermatozoa/oocyte ratio used with fresh semen. Keywords: artificial reproduction , cryobiology, fertility, Prochilontidae. Resumen Antecedentes: la crioconservacion es una herramienta biotecnologica importante para la conservacion de la biodiversidad, particularmente de especies en peligro. Objetivos: evaluar seis proporciones diferentes entre espermatozoides/ovocito en la fertilizacion de bocachico ( Prochilodus magdalenae ) , usando semen fresco o crioconservado. Metodos: se colecto semen y se determino su calidad para verificar su viabilidad de crioconservacion. El semen fue colocado en pajillas de 5 ml y mezclado con una solucion crioconservante (5,5% glucosa, 12% yema de huevo y 10% dimethyl sulfoxido -DMSO-) en una dilucion 1:4 (semen:solucion). El semen fue congelado en un termo de vapores de nitrogeno por 30 min y rapidamente se transfirio a termos de almacenamiento sumergiendolo directamente en nitrogeno liquido (LN; -196 °C). Las pajillas fueron descongeladas a 60 oC por 45 segundos. La motilidad, velocidad y progresividad de los espermatozoides, tanto de semen fresco como del congelado, fueron evaluadas usando el software Sperm Class Analyzer (SCA ® ). Cada proporcion de espermatozoides/ovocito fue evaluada en 2 g de huevos (1.630 ± 87 huevos/g) para evaluar fertilidad (F), eclosion (H) y sobrevivencia larval (LS). Resultados: el mejor desempeno reproductivo con semen fresco fue obtenido inseminando con la proporcion de 160.000 espermatozoides/ovocito (F = 75,0%, H = 67,7%, LS = 32,7%). De manera similar, el mejor desempeno reproductivo con semen crioconservado fue logrado con la proporcion de 320.000 espermatozoide/ovocito (F = 70,0%, H = 48,6%, LS = 19,5%). Conclusion: es posible lograr un adecuado desempeno reproductivo en bocachico usando semen crioconservado (10% DMSO, 5,5% glucosa y 12% yema de huevo) cuando la relacion espermatozoide/ovocito usada es del doble de la proporcion aplicada para semen fresco. Palabras clave: criobiologia, fertilidad, Prochilontidae, reproduccion artificial. Resumo Antecedentes: a criopreservacao e uma ferramenta biotecnologica importante na conservacao da biodiversidade, particularmente de especies ameacadas. Objetivos: foram avaliadas seis proporcoes de espermatozoides/ovocito na fertilizacao usando semen fresco e crioconservado em fertilizacao de bocachico ( Prochilodus magdalenae ) , Metodos: o semen fresco foi coletado e determinada sua qualidade para verificar a viabilidade de crioconservacao. O semen foi colocado em palhetas de 5 ml e misturado com a solucao crioconservante (5,5% glicose, 12% gema de ovo e 10% dimetilsulfoxido -DMSO-) em numa diluicao 1:4 (semen:solucao). O semen foi congelado em botijao de vapores de nitrogenio por 30 min e rapidamente transferido a botijao de armazenagem submergindo-os diretamente em nitrogenio liquido (LN; -196 °C). As palhetas foram descongeladas a 60 oC por 45 segundos. A motilidade, velocidade e progressividade dos espermatozoides, tanto de semen fresco quanto de congelado, foram avaliadas usando o software Sperm Class Analyzer (SCA ® ). Para avaliar fertilidade (F), eclosao (H) e sobrevivencia larval (LS), cada relacao de espermatozoide/oocito foi avaliada em 2 g de oocitos (1.630 ± 87 ovos/g). Resultados: o melhor desempenho reprodutivo com semen fresco foi obtido inseminando com proporcao 160.000 espermatozoides/oocito (F = 75,0%, H = 67,7%, LS = 32,7%). O melhor desempenho reprodutivo com semen crioconservado foi verificado na proporcao de 320.000 espermatozoides/oocito (F = 70,0%, H = 48,6%, LS = 19,5%). Conclusao: e possivel alcancar um adequado desempenho reprodutivo em bocachico usando semen crioconservado (10% DMSO, 5,5% glicose e 12% gema de ovo) quando a proporcao espermatozoide/oocito usada e o dobro da utilizada para semen fresco. Palavras chave: criobiologia, fertilizacao, Prochilontidae, reproducao artificial.

Insemination of bocachico fish (Prochilodus magdalenae) with fresh or cryopreserved semen: effect of spermatozoa/oocyte ratio