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Alguns trabalhos têm evidenciado a existência de genótipos de soja contrastantes para qualidade fisiológica de semente. Tais diferenças existem em virtude da presença de sementes com total ou parcial impermeabilidade do tegumento à água, o que as tornam menos susceptíveis aos danos mecânicos, as adversidades climáticas e a deterioração por umidade. A característica de tegumento semi-permeável pode ser incorporada às cultivares de alta produção por meio dos programas de melhoramento. No entanto, há necessidade de caracterizar os genes ou as regiões genômicas envolvidas com esta característica. Nesse contexto, ferramentas da biologia molecular, como a técnica de cDNA-AFLP, podem auxiliar a identificação de genes relacionados a qualidade fisiológica de sementes. O objetivo desse estudo foi verificar a eficácia da técnica de cDNA-AFLP, na obtenção de fragmentos de genes diferencialmente expressos entre tegumentos de sementes de soja com permeabilidade contrastante. Sementes provenientes dos genótipos CD-202 (tegumento amarelo, permeável e susceptível a deterioração) e TP (tegumento preto, semi-permeável e resistente a deterioração) foram cultivadas em casa-de-vegetação, sob condições homogêneas. Realizou-se a coleta das sementes em diferentes estágios de desenvolvimento (25, 30, 35, 40 e 55 dias após a antese). Procedeu-se à extração do RNA total utilizando-se três métodos, sendo o reagente Pure Link Plant RNA o mais eficiente. Para obtenção do cDNA dupla fita utilizou-se o kit Double Stranded cDNA Synthesis. A partir do cDNA obtido, aplicou-se a técnica de AFLP testando-se um total de 64 combinações de primers. Foram obtidos 47 fragmentos de cDNA diferencialmente expressos entre os tegumentos de sementes dos dois genótipos, os quais poderão ter suas funções reveladas pelo sequenciamento e análise in sílico. De acordo com os resultados obtidos, a técnica de cDNA-AFLP demonstra ser uma alternativa promissora para estudos que visem à identificação de genes relacionados a qualidade de sementes. Some studies have reported the existence of contrasting soybean genotypes for seed physiological quality. Differences such as presence of seeds with total or partial impermeability for water absorption through the seedcoat make them less susceptible to mechanical damage, adverse weather and deterioration. The semi-permeable seed coat trait can be used in soybean crop breeding programs to be incorporated in genotypes with high production. However, is necessary to characterize genes involved with the trait. Molecular biology tools, such as the cDNA-AFLP technique, can be used to identify genes involved in seed physiological quality. The objective of this study was to evaluate the efficacy of the cDNA-AFLP technique to obtain gene fragments differently expressed among soybean seedcoats with contrasting permeability. Seeds from two genotypes, CD-202 (susceptible to deterioration and permeable yellow coat) and TP (resistant to deterioration and semi-permeable black coat) were produced in greenhouse under homogeneous conditions. Seeds were harvested at different times (25, 30, 35, 40 e 55 days after anthesis). The total RNA was extracted using Pure Link Plant RNA reagent. The Double Stranded cDNA Synthesis Kit was used to obtain cDNA double strand. The AFLP technique was applied and 64 primer combinations were tested. This tool permitted the identification of 47 gene fragments differently expressed among coats from the two genotypes and was shown to be an efficient alternative to studies related to the identification of genes involved in seed quality

cDNA-AFLP na identificação de genes relacionados a qualidade fisiológica