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A análise da atividade enzimática da redutase do nitrato baseou-se no método do ensaio in vivo, que foi padronizado para os tecidos foliares e radiculares do abacaxizeiro cultivado in vitro. As maiores atividades enzimáticas foram obtidas quando se empregou como meio de reação uma solução tampão fosfato 0,1 M, contendo KNO3 100 mM e 3% de n-propanol, a faixa de pH ótimo foi de 6,5 a 7,5. O tempo de incubação foi de 60 min a 30 °C. Essa padronização mostrou-se muito importante para a análise do ritmo diurno da redutase do nitrato em abacaxizeiro, visto que as condições de ensaio in vivo dessa enzima variam muito entre diferentes espécies vegetais. As folhas apresentaram as maiores atividades na presença de luz. As raízes mostraram atividade da redutase do nitrato também na ausência de luminosidade em níveis semelhantes aos observados na presença de luz. A atividade observada nas raízes foi sempre superior à das folhas, sugerindo que as raízes têm um importante papel na redução do nitrato nas condições de cultivo in vitro. O acúmulo de nitrato observado durante o ciclo diurno, nas folhas, evidenciou que a presença desse íon ocorreu em maiores níveis durante o período luminoso, estabelecendo uma correlação positiva com a atividade da redutase do nitrato. Entretanto, nas raízes, as maiores concentrações foram observadas na ausência de luz. Nesse caso, discute-se a possibilidade de outros fatores, além do nitrato, estarem contribuindo positivamente, induzindo uma elevada atividade enzimática na presença de luz. Determination of nitrate reductase activity (NR) was based on the in vivo assay method, which was standardised for leaves and roots of pineapple cultivated in vitro. The highest activity was obtained when tissues were incubated in 0.1 M phosphate buffer, 100 mM KNO3 and 3% of n-propanol. The optimal pH ranged from 6.5 to 7.5. The incubation period was 60 min at 30 °C. This standardisation was important for the diurnal rhythm analysis of nitrate reductase activity in pineapple because the conditions of in vivo assay for this enzyme vary significantly among different plant species. The diurnal rhythm analysis showed that in leaves, the highest activity occurred during the day. The NR activity in the roots during the dark period was similar to that observed during the light period. The NR activity in roots was always higher than in leaves, indicating that roots are an important site for nitrate reduction when pineapple is cultivated in vitro. The nitrate accumulation in leaves during the diurnal cycle showed that it is present in higher concentrations in the light period. Therefore a positive correlation between nitrate concentration and NR activity could be established. In roots, however, the highest nitrate concentrations were observed in the absence of light. In this case, it is possible that other factors, besides nitrate, contributed to a higher enzymatic activity during the light period

Variações diurnas da atividade in vivo da redutase do nitrato em abacaxizeiro (Ananas comosus (L.) Merr. - Bromeliaceae)