AVALIAÇÃO DE MÉTODOS PARA OBTENÇÃO DE PROTEÍNAS RECOMBINANTES

A utilizacao de Pichia pastoris para a producao de proteinas recombinantes apresenta inumeras vantagens que esse sistema agrega, destacando-se a exportacao das moleculas para o meio extracelular. Isto permite que a obtencao das proteinas possa ser realizada por metodos de precipitacao, com uso de sais neutros ou solventes orgânicos, sem trazer prejuizos. O objetivo deste trabalho foi avaliar a utilizacao de sulfato de amonio, acetona e metanol para obtencao da proteina recombinante Bm86 do carrapato Rhipicephalus microplus expressa por P. pastoris . A acao provocada pelos solventes orgânicos ocasionou uma solubilidade parcial das proteinas. Na quantificacao por densitometria da proteina rBm86-CG, verificou-se que utilizando acetona (1:2) foi obtido 30,3 mg/L, metanol (1:2) 60,5 mg/L e com sulfato de amonio a 70% (83,5 mg/L). A manutencao das caracteristicas antigenicas apos a precipitacao foi verificada pela tecnica de Western Blot , sendo que a proteina rBm86-CG obtida pelos tres metodos foi reconhecida por anticorpos especificos. Os resultados sugerem que a precipitacao com sais neutros e solventes orgânicos pode ser utilizada para obtencao de proteinas recombinantes como a rBm86-CG, sem trazer prejuizos a sua antigenicidade.