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The comparison of the results obtained with a single photodynamic therapy (PDT) session using 630 nm light emitting diodes (LEDs) in the treatment of feline cutaneous squamous cell carcinoma (SCC) was the main objective of this study, where two different protoporphyrin IX precursors, methyl aminolevulinate (ALAME) and aminolevulinic acid (ALA) were tested. Nineteen animals comprising 24 SCC of the skin histologically confirmed were distributed into two groups, the first one was treated with ALAME and the second one was treated with ALA. Because of the negative results in tests for feline immunodeficiency virus (FIV) and feline leukemia virus (FeLV) it could not be found any correlation between these diseases and skin SCC in the studied cats. The temperature of the skin during the procedure was monitored showing no significative variation. All animals were submitted to clinical exams and blood tests before and after treatment and there were no alterations that could contraindicate PDT or could be attributed to treatment. Proliferating cell nuclear antigen (PCNA) immunohistochemistry was performed as a prognostic factor of PDT, however, the results were inconclusive and no correlation could be established. Ten SCC skin lesions were treated with ALAME-PDT in the first group, 30% had complete response, 30% had partial response, 20% had minimum response and 20% had no response. In ALA group, 14 SCC lesions were treated and there was no complete response at all 28,6% of the lesions showed partial response, 50% had minimum response and 21,4% had no response. PDT is a promising treatment for feline SCC under the studied conditions, with better results when performed with ALAME. SUMÁRIO Página 1. INTRODUÇÃO  16 2. OBJETIVOS  19 3. REVISÃO DE LITERATURA  20 3.1. Terapia Fotodinâmica  20 3.1.1. Histórico  20 3.1.2. Mecanismo de ação  22 3.1.3. Fotossensibilizadores  25 3.1.4. Ácido 5-aminolevulínico (ALA)  28 3.1.5. Metil aminolevulinato (MEALA)  30 3.1.6. Fonte de irradiação – diodos emissores de luz (LEDs)  32 3.2. Carcinoma espinocelular felino (CEC)  33 3.3. Vírus da imunodeficiência felina (FIV) e vírus da leucemia felina (FeLV) ... 35 3.4. Antígeno nuclear de proliferação celular (PCNA)  36 4. MATERIAIS E MÉTODOS  38 4.1. Seleção dos animais 38 4.1.1. Avaliação clínica dos animais selecionados  39 4.1.2. Diagnóstico clínico e histopatológico  39 4.1.3. Exames complementares realizados antes da PDT  40 4.2. Preparação da pomada  41 4.2.1. Síntese de metil aminolevulinato a partir do ácido 5-aminolevulínico .. 41 4.2.2. Aplicação da pomada 42 4.3. Condutas pré-anestésicas  43 4.4. Condutas anestésicas  43 4.5. Primeira colheita de sangue para dosagem sérica de ferro e ferritina e sorologia para FIV e FeLV  44 4.6. Procedimento de iluminação  44 4.6.1. Monitoração de temperatura de superfície  45 4.7. Segunda colheita de sangue para dosagem sérica de ferro e ferritina  46 4.8. Condutas após o procedimento  46 4.8.1. Retorno após 30 dias – repetição dos exames complementares  47 4.8.2. Retorno após 90 dias  47 4.8.3. Retorno após 150 dias – repetição do exame histopatológico  47 4.9. Quantificação imunoistoquímica para marcadores de proliferação celular (PCNA)  47 5. RESULTADOS E DISCUSSÃO  50 5.1. Avaliação clínica dos animais selecionados  50 5.2. Diagnóstico histopatológico e classificação clínica das lesões de CEC  53 5.3. Exames complementares realizados antes da PDT  55 5.3.1. Hemograma Completo  55 5.3.2. Função Renal  58 5.3.3. Função Hepática  59 5.4. Sorologia para FIV e FeLV  60 5.5. Ferro e Ferritina Grupo MEALA  61 5.6. Ferro e Ferritina Grupo ALA  64 5.7. Monitoração de temperatura de superfície  65 5.8. Condutas após o procedimento  66 5.8.1. Retorno após 30 dias – repetição dos exames complementares  66 5.8.1.1. Hemograma Completo  67 5.8.1.2. Função Renal  68 5.8.1.3. Função Hepática  68 5.9. Retorno após 90 dias resultados do tratamento do GRUPO MEALA  70 5.9.1. Avaliação da resposta clínica geral e acompanhamento dos animais após a PDT  70 5.10. Retorno após 150 dias avaliação da resposta pela análise histopatológica pós-tratamento do GRUPO MEALA  72 5.11. Retorno após 90 dias resultados do tratamento do GRUPO ALA  79 5.11.1. Avaliação da resposta clínica geral e acompanhamento dos animais após a PDT  79 5.12. Retorno após 150 dias avaliação da resposta pela análise histopatológica pós-tratamento do GRUPO ALA  81 5.13. Correlação da quantificação de células em fase S marcadas para o antígeno nuclear de proliferação celular (PCNA) com o prognóstico das lesões de CEC tratadas  88 5.14. Comparação das respostas dos grupos MEALA e ALA  93 6. CONCLUSÕES  101 7. SUGESTÕES DE TRABALHOS FUTUROS  102 8. APÊNDICES  103 9. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS  115 LISTA DE ABREVIATURAS ALA – Ácido Aminolevulínico ALAME – Methyl Aminolevulinate ALT – Alanina Aminotransferase ANVISA – Agência Nacional de Vigilância Sanitária AlPcS4 Aluminium Phthalocyanine Tetrasulfonate AST – Aspartato-Transaminase CBC – Carcinoma de Células Basais CEC – Carcinoma Espinocelular CHCM – Concentração de Hemoglobina Corpuscular DMBA – 9,10-Dimetil-1,2-Benzantraceno ELISA – Enzyme Linked Immuno Sorbent Assay FA – Fosfatase Alcalina FC – Freqüência Cardíaca FDA – Food and Drug Administration FeLV – Vírus da Leucemia Felina FIV – Vírus da Imunodeficiência Felina FPC – Fração de Proliferação Celular FR – Freqüência Respiratória GGT Gama-Glutamil Transferase HCM – Hemoglobina Corpuscular Média HpD – Derivado de Hematoporfirina LED – Light Emitting Diode (Diodo Emissor de Luz) LSAB – Labeled Streptavidin Biotin MEALA – Metil Aminolevulinato ou Metil Éster do Ácido Aminolevulínico OMS – Organização Mundial de Saúde PBS – Phosphate-Buffered Saline PCNA – Antígeno Tumoral de Proliferação Celular PDT – Photodynamic Therapy (Terapia Fotodinâmica) PPIX – Protoporfirina IX PT – Proteína Total QWIP – Quantum Well Infrared Photodetector VCM – Volume Corpuscular Médio WHO – World Health Organization

Comparação da eficácia do ácido 5-aminolevulínico com a de seu metil éster utilizando-se a terapia fotodinâmica no tratamento de carcinoma espinocelular felino