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10 1. INTRODUÇÃO  11 2. REVISÃO BIBLIOGRÁFICA  13 2.1. Citricultura no Brasil e no mundo  13 2.2. Transformação genética 15 2.3. Promotores para a expressão constitutiva de genes  18 3. MATERIAL E MÉTODOS  23 3.1.Identificação e isolamento dos promotores de genes constitutivos de citros  23 3.2.Clonagem dos promotores CsGAPC2, CsEF1 e CsCYC  24 3.3. Elaboração das construções gênicas pC2201CsGAPC2/uidA, pC2201CsEF1/uidA e pC2201CsCYC/uidA  25 3.4.Transformação genética de C. sinensis  27 3.5. Ensaio histoquímico da atividade β-Glucuronidase em plantas transgênicas de C. sinensis  30 3.6. Análise de Southern blot  31 3.7.Quantificação da expressão do gene uidA por análise de RT-qPCR  31 3.8 Caracterização dos elementos cis-regulatórios nos promotores CsGAPC2, CsCYC e CsEF1  34 3.9. Análises de deleção  34 3.9.1. Elaboração das construções gênicas de deleção  34 3.9.2. Expressão transiente em Nicotiana benthamiana  38 3.9.3. Transformação genética de N. benthamiana 39 3.9.4. Ensaio histoquímico da atividade GUS em plantas transgênicas de N. benthamiana ... 41 3.9.5.Ensaio fluorimétrico da atividade GUS em plantas transgênicas de N. benthamiana .... 41 4. RESULTADOS  43 4.1. Elaboração das construções gênicas  43 4.1.1. Construções gênica pC2201CsGAPC2/uidA 43 4.1.2. Construção gênica pC2201CsEF1/uidA  44 4.1.3. Construção gênica pC2201CsCYC/uidA  46 4.2. Transformação genética de C sinensis  50

Isolamento e caracterização de promotores de genes constitutivos de Citrus sinensis