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O coronavirus bovino (BCoV) e um virus RNA simples fita, de sentido positivo, nao segmentado com envelope constituido de uma camada dupla de lipidios com quatro proteinas (HE, S, E e M) que resultam no aspecto de coroa dos virions. Como a HE (hemaglutinina-esterase) e uma proteina polimorfica com uma funcao de receptor aglutinante secundaria, estudos sobre a diversidade do gene HE podem possibilitar maiores informacoes sobre a evolucao e interacao hospedeiro-parasita do BCoV. Uma reacao de hemi-nested RT-PCR foi desenvolvida para a amplificacao de um produto de 441pb do gene HE do BCoV (nt 543 ao 562). Temperaturas otimas de hibridizacao foram testadas em um termociclador com gradiente para a reacao de hemi-nested e utilizada no protocolo final. A sensibilidade analitica foi determinada por meio da diluicao serial na base 10 do BCoV amostra Kakegawa (titulo HA: 256) em uma suspensao fecal negativa para BCoV, resultando positiva ate a diluicao de 10-6, mostrando uma alta sensibilidade analitica sem inibicao na PCR. O protocolo final da hemi-nested RT-PCR foi aplicado a 21 amostras fecais de vacas previamente positivas para BCoV e o sequenciamento de DNA do produto de 441pb de 14 amostras resultaram em sequencias com elevado escore do gene HE do BCoV apos a analise no BLAST/n. Essa hemi-nested RT-PCR e uma ferramenta poderosa para estudos de diversidade filogenetica de linhagens de campo de BCoV e para estudos comparativos entre os diferentes genes dos Coronavirus.

Reação de hemi-nested RT-PCR dirigida ao gene da hemaglutinina-esterase do Coronavírus Bovino