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Confluent epithelia of autologous keratinocytes, cultivated according to standardized methodology by Rheinwald and Green in 1975, have been used as grafts in different clinical situations. However, the presence of xenobiotics components applied in this method implies the possibility of transmission of zoonoses, príons, and viruses to patients, besides involving ethical issues related to the use of animals for components obtainment. Such concerns have driven researchers to seek alternatives that overcome this deadlock, as the formulations obtained so far are not completely satisfactory. Thus, our proposal in this study was to omit or replace the xenobiotics components traditionally used in the medium to keratinocytes culture, by human similar. As a result, we have standardized a culture medium whereby we omitted the use of cholera toxin, replaced fetal bovine serum by human platelet lysate at a 2.5% concentration and bovine insulin was replaced by recombinant human insulin at the same concentration as the original method (5 μg/mL). With the results obtained we could conclude that the method to be viable to cultivate human keratinocytes, kept in culture medium free of xenobiotics components. LISTA DE ABREVIAÇÕES E SIGLAS  ADP – adenosine difosfato  Ala alanina  Arg – arginina  ANOVA – análise de variância  Asn – asparagina  Asp – aspartato  ATCC – American Type Culture Collection  bFGF – fator básico de crescimento para fibroblasto  CØ – meio controle sem soro  cAMP – AMP (adenosine monofosfato) cíclico  CAPM– cininogênio de alto peso molecular  cDNA – DNA (ácido desoxcomplementar  CAPPesq/HC-FMUSP –Comissão de Ética para Análise de Projetos de Pesquisa/ Hospital das Clínicas – Faculdade de Medicina da Universidade de São Paulo  CCL-92 – linhagem celular de fibroblastos murinos  cm – centímetro (1x10 m)  COEP/FSPUSP – Comitê de Ética e Pesquisa  Cys – cisteina  DMEM – Dulbecco’s Modifeid Eagle Medium (meio de cultura)  EDTA – ácido etilenodiaminotetracético  EEB – encefalopatia espongiforme bovina (doença de vaca louca)  EFC – eficiência de formação de colônias  EGF – fator de crescimento epidermal  ELISA – ensaio imunoenzimático  F12 – F12 nutrient mixture (meio de cultura)  Gln – glutamine  Glu – glutamate  Gly – glicina  Gp – glicoproteínas  Gy gray  His – histidina  HTL – vírus linfotróficos de células T humanas  ICHC – Instituto Central do Hospital das Clínicas  IFE – epiderme interfolicular  IGF – fator de crescimento semelhante a insulina  Ile – isoleucina  K+ nomenclatura adotada em nosso laboratório, para designar meio de cultura tradicionalmente utilizado para a cultura de queratinócitos e empregado como controle neste trabalho  kDa – kilodaltons  LPA – lisado de plaquetas, método de prepare A  LPB – lisado de plaquetas, método de preparo B  LPC – lisado de plaquetas, método de preparo C  Leu – leucina  LMWH – heparina de baixo peso molecular  LP – lisado de plaquetas  Lys – lisina  Met – metionina  mL – mililitros (1x10 -3 L)  mM – millimolar (1x10 M)  MTS – composto tetrazólico, reduzido pela atividade de enzimas mitocondriais, a um produto formazan, cuja intensidade de coloração é diretamente proporcional à quantidade de células viáveis em cultura  μg – nanograma (1x10 g)  μm – nanômetro (1x10 m)  μM – nanomolar (1x10 M)  ng – nanograma (1x10 -9 g)  nm – nanômetro (1x10 m)  nM – nanomolar (1x10 M)  PDF – produtos de degradação da fibrina  PDGF – fator de crescimento derivado de plaquetas  PF-4 – fator plaquetário 4  PH – potencial de hidrogênio  Phe – fenilalanina  pM – picomolar (1x10 M)  PMS – fenazina metasulfato  Pro – prolina  PRP – plasma rico em plaquetas  PVDF – fluoreto de polivinilideno  Ser – serina  SFB – soro fetal bovino  SIDA – síndrome da imunodeficiência adquirida  T3 – triiodotironina  TGF – β – fator de transformação do crescimento β  Thr – treonina  tPA – ativador do plasminogênio tecidual  Trp – triptofano  TXA2 – tromboxano A2  Tyr – tirosina  UFH – heparina não fracionada  UI – unidade internacional  Val – valina  VC – viabilidade celular  vWF – fator von Willebrand

Substituição dos componentes xenobióticos empregados no meio de cultura para manutenção de queratinócitos humanos, por similares de origem humana