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SummaryThe immunohistological detection of insulin in whole pancreatic tissue and isolated islets was studied, using cryostat sections, freeze-dried material and in formalin-fixed tissue. Cryotomy produces unsatisfactory results and can only be used as a screening procedure. The freeze-drying technique followed by paraffin embedding is time consuming, but possesses an advantage in that it best guards the natural morphological relationships in cells and tissue. — The results of experiments designed to determine the immunohistologically-provable content of insulin in the islets of Langerhans of rats by means of various stimulants to insulin secretion are reported. Intravenously injected glucose in high concentration (10 g/kg) does not lead to an immunohistologicallyprovable decrease in the insulin content of the beta cells, after either 2, 4 or 24 h. During the first 6 h following a single intravenous medication of tolbutamide (500 mg/kg) or of glibenclamide (1 mg/kg) there is no decrease in the immunofluorescence of the beta cells. The decrease, apparent after 8 h, becomes more clear in a wide range of cells after 12 h, and has reached its climax after 24 h. At this time, nearly all of the cells of the islet are degranulated except those in the periphery. On the contrary, 5 h following intravenous injection of insulin antibodies, an almost total decrease in immunohistologically-provable insulin can be observed.RésuméNous avons comparé trois techniques histoimmunologiques différentes chez le rat sur les cellules bêta du pancréas: les coupes après congélation de tissus frais, la méthode de congélation-dessiccation et la méthode avec du matériel fixé à la formaline. La méthode des coupes après congélation de tissus trouve une limitation dans la difficulté d' obtenir de bonnes préparations cytologiques. La méthode de congélation-dessiccation offre de nombreux avantages, p.ex. l'immobilisation instantanée et définitive des constituants des tissus et le fait que les changements chimiques dans les tissus sont réduits au minimum, mais elle exige beaucoup de temps. — Nous avons montré l'effet de la tolbutamide et de la glibenclamide sur les cellules bêta avec la méthode de fixation à la formaline. In vivo, l'administration intra-veineuse de glucose (10 g/kg) ne produisait pas de dégranulation des cellules B après 2, 4 et 24 h. En utilisant une seule injection de tolbutamide (500 mg/kg) et de glibenclamide (1 mg/kg) il n'y avait pas de diminution de la fluorescence pendant les premières 6 h. Par contre, après 8 h, nous avons remarqué une faible diminution de la fluorescence qui s'accentuait pendant les 12 et 24 h suivantes. Après 24 h les îlots de Langerhans présentaient un centre complètement dégranulé et seulement quelques cellules halopériphériques réagissaient aux anticorps anti-insuline marqués à la fluorescéine. Inversement l'administration intraveineuse d'anticorps anti-insuline produisait une dégranulation complète après 5 h.ZusammenfassungDie Arbeit schildert zunächst die verschiedenen Möglichkeiten des immunhistologischen Nachweises von Insulin im Pankreas. Als optimale Methode zur Aufarbeitung des Gewebes erwies sich die Formalinfixation mit folgender Paraffineinbettung. Die Kryostattechnik liefert unbefriedigende Resultate und eignet sich nur als Screening-Verfahren. Die Gefriertrocknungstechnik mit folgender Paraffineinbettung ist zeitlich recht aufwendig und hat den Nachteil der limitierten Gewebsgröße. Sie bietet dagegen den Vorteil, daß sie die natürlichen Verhältnisse in Zelle und Gewebe am besten bewahrt. — Anschließend wird über die Auswirkungen von Stimulationsversuchen zur Insulinsekretion auf den immunhistologisch nachweisbaren Insulingehalt der Langerhans'schen Inseln bei der Ratte berichtet. Intravenös injizierte Glucose führt auch in hoher Konzentration (10 g/kg) weder nach 2, 4 noch nach 24 Std zu einer immunhistologisch nachweisbaren Abnahme des Insulingehaltes der B-Zellen. Nach einmaliger intravenöser Gabe von Tolbutamid (500 mg/kg) sowie von Glybenclamid (1 mg/kg) kam es ebenfalls in den ersten 6 Std zu keiner Verminderung der Immunfluoreszenz der BZellen. Diese zeigt sich erst nach 8 Std an einzelnen Zellen des Inselzentrums, wird deutlicher nach 12 Std in einem größeren Zellbereich und hat nach 24 Std durch Entspeicherung fast aller Zellen mit Ausnahme der Peripherie ihr Maximum erreicht. Im Gegensatz dazu tritt nach intravenöser Injektion von Insulinantikörpern eine nahezu komplette Entspeicherung von immunhistologisch nachweisbarem Insulin bereits nach 5 Std ein.

diabetologia

Immunohistological demonstration of insulin in islets of langerhans after stimulation of insulin secretion by glucose, sulphonylureas and insulin antibodies