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Los viroides son pequenos RNAs circulares de cadena sencilla (246-401 nt) patogenos de plantas. A pesar de su pequeno tamano y de no codificar proteinas, son capaces de replicarse autonomamente, moverse sistemicamente y, en la mayoria de los casos, provocar enfermedades en sus plantas huesped. La replicacion de los viroides ocurre a traves de un mecanismo de circulo rodante con intermediarios de RNA que consta de tres etapas: (1) transcripcion RNA-RNA que origina RNAs oligomericos de polaridad complementaria, (2) procesamiento de algunos de estos oligomeros a monomeros lineales, y (3) circularizacion de estos ultimos. Puesto que los viroides no codifican proteinas, su replicacion depende de la interaccion del RNA viroidal con factores del huesped. La etapa menos conocida de este ciclo replicativo es la ligacion de los monomeros lineales para generar el producto de la replicacion, la forma circular monomerica. Asi pues, los objetivos de esta Tesis Doctoral han sido: 1) Identificar los factores del huesped implicados en la ligacion de los viroides nucleares (familia Pospiviroidae) y cloroplasticos (familia Avsunviroidae) durante su replicacion, empleando los sistemas experimentales viroide del tuberculo fusiforme de la pata (PSTVd)-tomate y viroide latente de la berenjena (ELVd)-berenjena. 2) Caracterizar la interaccion de estos factores con los RNAs viroidales desde un punto de vista bioquimico y funcional. En el caso de los viroides nucleares, se ha identificado la DNA ligasa 1 como el factor probablemente implicado en la ligacion de los RNAs monomericos lineales. Respecto a los viroides cloroplasticos, diferentes ensayos in vitro han puesto de manifiesto que la tRNA ligasa es muy probablemente el factor del huesped implicado en la ligacion de los intermediarios replicativos.

Caracterización de actividades RNA ligasa implicadas en la replicación de los viroides nucleares y cloroplásticos