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Los neutrofilos humanos estimulados por forbol-miristato-acetato (PMA), un activador de la proteina quinasa C, producen oxigeno activo por la NADPH oxidasa en las estructuras intracelulares. Hemos anadido diacetato de 2´, 7-dihidro dicloro fluoresceina (H2DCFDA), que emite fluorescencia cuando se oxida con las especies de oxigeno activo, a neutrofilos para producir oxigeno activo, a fin de investigar el efecto antioxidante del acido protocatequico, el acido ferulico y el acido cafeico que pertenecen a polifenoles y se distribuyen ampliamente entre las plantas. Particularmente, nos enfocamos en examinar si estas sustancias capturan y eliminan el oxigeno activo dentro o fuera del citoplasma de neutrofilos y si estas sustancias inhiben la NADPH oxidasa. La microscopia de fluorescencia demostro que las estructuras intracelulares positivas a fluorescencia disminuyeron en los neutrofilos mediante la estimulacion de la PMA y exposicion a un antioxidante. La medicion cuantitativa por citometria de flujo revelo que la intensidad de fluorescencia en los neutrofilos, expuestos al acido protocatequico, el acido ferulico, o el acido cafeico, se redujo un 62,9%, 71,4% y 86,1%, respectivamente, en comparacion con las estimuladas por PMA pero no expuestas a un antioxidante. A juzgar desde la microscopia de fluorescencia y la citometria de flujo, estos antioxidantes no tuvieron efectos sobre la morfologia de los neutrofilos. Por otra parte, la intensidad de fluorescencia del oxigeno activo liberado por los neutrofilos se redujeron un 81,4%, 46,7% y 27,4%, respectivamente. El DPI (difenileno-iodonio), un inhibidor especifico de la NADPH oxidasa, inhibio a la enzima en el 92,1% en los neutrofilos estimulados por PMA. El acido protocatequico, el acido ferulico y el acido cafeico inhiben la enzima en un 36,5%, 54,6% y 27,4%, respectivamente. Estos resultados demuestran que el acido protocatequico, el acido ferulico y acido cafeico capturan y eliminan el oxigeno activo, producido por el PMA estimulado por neutrofilos, intracelular y extracelularmente. Ademas, estos antioxidantes inhiben parcialmente la actividad NADPH oxidasa.

Antioxidant Effects of Protocatechuic Acid, Ferulic Acid, and Caffeic Acid in Human Neutrophils Using a Fluorescent Substance