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Mycoplasma hyopneumoniae e o agente etiologico da pneumonia enzootica, enfermidade distribuida mundialmente em rebanhos suinos nas fases de crescimento e terminacao. A pneumonia enzootica tem sido considerada uma das mais importantes causas de perdas economicas na suinocultura mundial. Tendo em vista a disponibilidade dos genomas completos de tres linhagens diferentes de M. pneumoniae , sendo duas patogenicas (linhagens 7448 e 232) e outra nao patogenica (linhagem J) e a ausencia de sistemas geneticos adequados para o estudo destes genomas, e necessidade emergente o desenvolvimento de ferramentas geneticas funcionais neste organismo. Atualmente, cinco especies de micoplasmas possuem vetores replicativos para transformacao. No entanto nenhum deles possui a oriC de M. hyopneumoniae , e estudos sugerem que estes vetores sao especie-especificos e nao seriam replicados em M. hyopneumoniae . Este trabalho teve como objetivos a construcao de um vetor replicativo e o desenvolvimento de um sistema para transformacao de M. hyopneumoniae . Os resultados alcancados constituem uma etapa previa e imprescindivel para o estudo de supostas regioes promotoras nesta especie. O plasmidio replicativo pOSTM construido neste trabalho foi obtido a partir do vetor pUC18, adicionando-se a origem de replicacao de M. hyopneumoniae e o cassete de expressao do gene de resistencia a tetraciclina (tetM), controlado pelo promotor do gene da espiralina de Spiroplasma citri . A transformacao foi realizada atraves de eletroporacao e as celulas transformantes foram selecionadas pelo fenotipo de resistencia a tetraciclina. Os transformantes resistentes a tetraciclina foram confirmados atraves da amplificacao por PCR de porcao do vetor inserido nas celulas. Tal comprovacao permite concluir que o M. hyopneumoniae e um organismo susceptivel a transformacao e que o determinante tetM heterologo e funcional neste patogeno.

Construção de vetor oriC de Mycoplasma hyopneumoniae – uma ferramenta para estudos genéticos do agente da pneumonia enzoótica suína