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El presente estudio tuvo como objetivo estandarizar una tecnica de PCR en tiempo real con sondas TaqMan para detectar la presencia de leptospiras patogenas en orina de perro infectada in vitro con cepas patron de Leptospira sp. Las muestras fueron obtenidas de un perro clinicamente sano y negativo a la prueba de microaglutinacion. Se utilizaron los cebadores Lepto R y Lepto F, especificos para Leptospira sp y una sonda TaqMan Lepto probe que amplifican e hibridan, respectivamente, una porcion del gen rrs, capaces de diferenciar entre especies patogenas y no patogenas de Leptospira. Se estandarizo el protocolo de PCR en 35 ciclos, con un proceso de desnaturalizacion inicial a 95 °C por 5 min, seguida por una desnaturalizacion a 95 °C por 15 s y finalmente el alineamiento y extension en un solo paso a 60 °C por 1 min. Los valores de ciclo umbral (Ct) determinados durante la estandarizacion de la PCR estuvieron en un rango de 12.53 a 18.21 para las 25 cepas patogenas de Leptospira sp, en tanto que las cepas saprofitas y otros bacterias no dieron productos especificos. El estandar fue detectado hasta una dilucion de 102 con un Ct de 29.98 a una eficiencia de 1.13 y con un coeficiente de correlacion (R2) de 0.993. Se detecto ADN en las muestras de orina infectada desde la dilucion de 107 leptospiras/ml con un valor de Ct de 17.54 hasta una minima dilucion de 102 leptospiras/ml con un valor de Ct de 29.87.

Estandarización de una Técnica de PCR en Tiempo Real con Sondas TaqMan para la Detección de Leptospira spp Patógenas en Orina de Canes Domésticos