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1. INTRODUÇÃO  14 1.1 Homeostase do linfonodo  14 1.2 Populações de células não-hematopoéticas no linfonodo  15 1.3 Células duplo-negativas  17 1.4 Células Fibroblásticas Reticulares  18 1.4.1 Produção de quimiocinas pelas células fibroblásticas reticulares 22 1.4.2 Células fibroblásticas reticulares na indução de tolerância periférica  26 1.4.3 Podoplanina e CLEC-2  30 1.4.4 Interação entre as células reticulares fibroblásticas e células dendríticas 31 1.4.5 Remodelamento da rede de células fibroblásticas reticulares na expansão do linfonodo durante a resposta imune  32 1.5 Expressão gênica das células fibroblásticas reticulares e células duplo-negativas na homeostase e na inflamação  34 2. HIPÓTESE GERAL  36 3. JUSTIFICATIVA  36 4. OBJETIVOS  37 4.1 Geral  37 4.2 Específicos  37 5. MATERIAL E MÉTODOS  38 5.1 Característica amostral  38 5.2 Análise anatomopatológica e imuno-histoquímica  38 5.3 Obtenção de células estromais e linfócitos a partir de linfonodos humanos  39 5.4 Cultivo celular  40 5.5 Caracterização imunofenotípica de FRCs e DNCs por citometria de fluxo  40 5.6 Separação celular por cell sorting  42 5.7 Procedimento de extração de RNA  42 5.8 Avaliação da expressão gênica por microarranjos de DNA e validação dos resultados  43 5.9 Curva de Proliferação celular 43 5.10 Ensaio de expressão de PDPN  44 5.11 Ensaio de Curva de expressão de PDPN  44 5.12 Detecção da produção de quimiocinas e citocinas por ELISA  45 5.13 Ensaio de expressão de proteínas de superfície celular por citometría de fluxo 45 5.14 Análises de FACs  46 5.15 Análise estatística  46 6. RESULTADOS  47 6.1 A análise anatomopatológica e imuno-histoquímica dos linfonodos evidenciou morfologia íntegra dos órgãos isolados  47 6.2 Caracterização imunofenotípica das células obtidas dos linfonodos humanos ... 49 6.3 A frequência de células estromais isoladas de linfonodos humanos varia segundo a expressão de gp38  51 6.4 Separação das FRCs e DNCs por cell sorting  53 6.5 Expressão gênica de DNCs e FRCs  55 6.6 Curva de proliferação de DNCs e FRCs  60 6.7 FRCs e DNCs aumentam a expressão de gp38 após tratamento com citocinas inflamatórias  61 6.8 Curva de expressão de gp38 nas FRCs  63 6.9 Estímulo inflamatório induz aumento na secreção de quimiocinas pelas FRCs e DNCs  64 6.10 Estímulo inflamatório contribui para secreção de citocinas pelas DNCs e FRCs  66 6.11 DNCs e FRCs alteram a expressão de moléculas de superfície envolvidas na resposta imune após estímulo inflamatório  68 7. DISCUSSÃO  73 8. CONCLUSÃO  84 9. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS  85

Identificação, isolamento e caracterização funcional de células fibroblásticas reticulares derivadas de linfonodos humanos